環境微生物學實驗報告

一、實驗目的

（1）瞭解普通光學顯微鏡的構造及原理，掌握顯微鏡的操作及保養方法。（2）觀察、識別幾種原核微生物。真核微生物的個體形態，學會生物圖的繪製。

二、實驗器皿與材料

（1）器皿：顯微鏡、擦鏡紙、二甲苯。

（2）材料：示範片：細菌三形（球狀、桿狀、螺旋狀）、弧狀（硫酸鹽還原菌）、絲狀（浮游球衣菌等）、細菌鞭毛及細菌莢膜。放線菌、顫藍細菌、微囊藍細菌或念珠藍細菌等。

三、實驗步驟

（1）將標本片放在載物台上，使觀察的目的物置於圓孔正中央。（2）將鏡頭換成低倍鏡，將粗調節器向下旋轉（或載物台向上旋轉），眼睛注視物鏡。當物鏡的尖端距離載玻片約0.5cm處時停止旋轉。

（3）左眼對着目鏡觀察，將粗調節器向上旋轉，如果見到目的物，但不十分清楚，可用細調節器調節，直至目的物清晰。此時找到目的物並移至中央。（4）換成高倍鏡，觀察目的物，旋轉細調節鈕，直至視野清晰。（5）觀察示範片，繪出其形態圖。

四、思考題

（1）使用油鏡時，為什麼要先用低倍鏡觀察？答：為了找到目的物並移動到中央。

（2）要使視野明亮，除採用光源外，還可採取哪些措施？

答：調大孔徑光闌，調整光源。如果是用反光鏡的顯微鏡，用凹面鏡可使視野明亮。

五、生物圖

實驗二、微生物培養基的配製與滅菌

一、實驗目的

（1）熟悉玻璃器皿的洗滌和滅菌前的準備工作。

（2）瞭解配置微生物培養基的基本原理，掌握配置、分裝培養基的方法。（3）學會各類物品的包裝、配置（稀釋水等）和滅菌技術。

二、實驗器皿與材料

（1）實驗器皿：高壓蒸汽滅菌器、乾燥箱、煤氣燈、培養皿、試管、刻度移液管、錐形瓶、燒杯、兩桶、藥物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉網、藥匙、鐵架、表面皿、pH試紙和棉花等。

（2）材料：牛肉膏、蛋白腖、NaCl、NaOH和瓊脂等。

三、實驗原理

培養基是微生物生長的基質，是按照微生物營養、生長繁殖的需要，由碳、氫、氧、氮、磷、硫、鉀、鈉、鈣、鎂、鐵及微量元素和水，按一定的體積分數配置而成。調整合適的pH，經高温滅菌後以備培養微生物之用。由於微生物種類及代謝類型的多樣性，因而培養基種類也多，它們的配方及配製方法也各有差異，但一般的配製過程大致相同。

四、實驗步驟

1、取100mL蒸餾水倒入錐形瓶；

2、稱取牛肉膏0.5g，蛋白腖1g，NaCl0.5g，瓊脂20g；3、用100g/LNaOH調節pH至7.2~7.4；4、蓋上棉塞，121℃下滅菌15~20min。

五、思考題

1、固體培養基加瓊脂後加熱溶化時要注意哪些問題？答：（1）加熱器功率不能太高，也不能太低。太高，容易沸騰和把培養基燒

焦；太低，培養基容易凝固。

（2）受熱要均勻，可以墊上石棉網，要用玻璃棒不停緩慢攪拌。

（3）加熱完畢後，要在合適的温度（60℃左右）倒平板，防止凝固。2、培養基中加瓊脂的作用是什麼？答：瓊脂的作用就是讓培養基凝固。3、如何檢查培養基滅菌是否徹底？

答：將滅菌後的培養基按滅菌鍋內不同位置,每處抽取數管標號,置25至30

攝氏度培養一週左右進行檢查,若培養基無什麼變化説明滅菌效果較好

實驗三、細菌的革蘭氏染色

一、實驗目的

（1）瞭解細菌的塗片及染色在微生物學實驗中的重要性。

（2）學會細菌染色的基本操作技術，從而掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法。

二、染色原理

微生物細胞由蛋白質、核酸等兩性電解質及其他化合物組成。所以，微生物表現出兩性電解質的性質。兩性電解質兼有鹼性基和酸性基，在酸性溶液中解離出鹼性基，呈鹼性帶正電；在鹼性溶液中解離出酸性基，呈酸性帶負電。經測定，細菌等電點（pI）在2~5之間時，大多以兩性離子存在，當細菌在中性、鹼性或偏酸性溶液中時，細菌帶負電荷，所以容易與帶正電荷的鹼性染料結合，故用鹼性染料染色的為多。

微生物體內各結構與染料結合力不同，故可用各染料分別染微生物的各結構以便觀察。

三、實驗器皿、試劑、材料

（1）器皿：顯微鏡、接種環、載玻片、酒精燈。

（2）試劑：草酸銨結晶紫染液、革蘭氏碘液、體積分數為95%的乙醇、質量濃度為5g/L的沙黃染色液等。

（3）材料：枯草桿菌、大腸桿菌。

四、實驗步驟

（1）塗片：載玻片滴一滴蒸餾水蘸菌染勻（2）初染：用草酸銨結晶紫染液染色1~2min後水洗（3）媒染：用革蘭氏碘液染色1~2min後水洗

（4）脱色：滴加體積分數為95%的乙醇，約45s後水洗（5）復染：滴加番紅染色2~3min後水洗並乾燥（6）鏡檢：用顯微鏡觀察菌體形態

五、思考題

（1）要得到正確的革蘭氏染色結果必須注意哪些操作？關鍵在哪幾步？為什麼？

答：應注意乾燥時不要用火燒太久。關鍵在於塗片，塗片的時候要注意塗均勻，並且兩個菌的量也要差不多，否則太厚的地方脱色就不均勻了。