母豬繁殖障礙疾病的血清學調查報告

母豬繁殖障礙疾病的血清學調查報告

摘要:隨着豬場規模化、集約化程度的不斷提高,豬病的種類也在不斷增加,特別是近年來的母豬繁殖障礙性疾病嚴重製約生豬產業的發展。2004年我們引進了帶有外種血緣的外種豬洋二元母豬，進行了優良品種推廣，結果80%的豬場母豬普遍出現第一胎髮生流產、早產、死胎，新生仔豬和斷奶仔豬發病率和死亡率增高，高達20%，而母豬一般無臨慶症狀，對這情況我們凝似是母豬繁殖障礙性疾病，故進行了血清調查。共採血抽樣237份，分離血清212份，並對分得的212份血清全部進行藍耳病（PRRS）檢測，其中陽性80份，陽性率37.7%；對其中的160份血清進行了偽狂犬（PR）檢測，160份進行了豬瘟（HC）檢測，160份血清進行了細小病毒（PPV）檢測。結果表明:一十三個豬場均有以上母豬繁殖障礙病存在。由此可見：母豬繁殖障礙病在我縣外種豬場已普遍存在。

關鍵詞：母豬;繁殖與呼吸綜合徵;調查;血清學;檢測

As hog farms have increased in both size and efficiency,so have hog disease types,In rencent yesrs,the problem has been especially serious among breeding sows,where disease has increased inferticity and negatively affected the development of the hog breeding industry In 2004,blood was collected from 237 sous From these,212 samples of serum were successfully produced and tested for bluc Ear pisease (PRRS) positive test rate Was 37.7 percent (80 positive samples)Also tests for three types of disease porcine pseuudo rabies(PR),swine Fever(HC),and wicroscopic Viral infection (PPV)were performed,each test on 160 of the samples.

Sow;porcine reproductive and respiratory

母豬繁殖障礙疾病是近年來危害母豬的一種主要的疫病，現已被廣範受到人們的重視，它以妊娠母豬發生流產、死胎、木乃伊胎、產弱仔、畸形胎和母豬不育、配不上種為主要特徵的一類疾病。此病主要包括豬瘟(HC)、豬偽狂犬病(PR)、豬細小病毒病(PPV)、繁殖障礙與呼吸綜合徵(PRRS)和豬乙型腦炎(JE)等幾種病。2004年我們對存在有明顯繁殖障礙病的13個豬場的237母豬頭進行採血，分離血清212份，並對分得的212份血清全部進行了檢測，對其中的160份血清進行了豬偽狂犬、豬細小病毒檢測，並根據檢測結果對母豬繁殖障礙原因進行了分析總結，現將詳細情況分述如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清

被檢血清來13個母豬場，耳靜脈採血，3600轉/min分離血清，待檢。

1.1.2 主要診斷試劑

藍耳病ELISA試劑盒：由美國IDEXX公司提供；

豬瘟診斷抗原及陰、陽性血清：由蘭州獸醫研究所提供；

豬偽狂犬LAT診斷液試劑盒：由華中農業大學提供；

豬細小病毒LAT診斷液試劑盒：由華中農業大學提供。

1.2 方法

1.2.1母豬繁殖於呼吸綜合症方法：間接ELISA

A採樣：常規採血，分離血清，無腐敗、溶血、凝塊和沉澱。

B準備：

A試驗前將所有試劑從冰箱中取出，置室温下達到室温，並輕輕搖勻，用後立即放回冰箱。

B將達到室温並完全溶解的洗液深縮用滅菌水或去離子水稀釋10倍。

C將待檢血清用稀釋液進行40倍稀釋；注意匆將陽性/陰性對照血清稀釋。

C取出抗原孢被的96孔板（該板的1、3、5、7、9、11列孔包被的PRRS抗原，2、4、6、8、10、12列孔包被的正常MARC—145細胞抗原），在工作表上標記好樣品的位置。

D取100UL陰性血清分別加入C1、C2、D1、D2孔中。

E取100UL陽性血清分別加入A1、A2、B1、B2孔中。

F取100UL稀釋的待檢血清分別加入相鄰的PRRS抗原孔和MARC—145細胞抗原孔（NHC）中。

H在室温下孵育30mim。

L將反應板孔裏的液體倒入廢液缸，並在吸水紙上扣幹。

J每孔加入300UL洗滌液（含Tween—20的PBS），置室温約3mim，棄去孔中液體，重複3—5次，最後一次在吸水紙水輕輕釦幹。

K每孔加入100UL酶標抗體複合物，在室温下孵育30mim。並利用此空隙，取等量底物濃縮液和底物稀釋液混勻（如5.5ml：5.5ml）。

L重複I、J操作。

M每孔加入100UL稀釋好底物溶液，在室温下孵育15mim。

N每孔加入100 終止液

O用酶聯免疫檢測儀於650NM波長下測定各孔的吸光度值。

Q結果判定：

a pc：PRRS—NC：PRRS≥0.150，試驗方成立。

b S/P≥0.4，樣品血清PRRS抗體陽性；S/P＜0.4，樣品血清PRRS抗體陰性。

1.2.2 豬瘟檢測方法：正向血凝試驗

a取一潔淨玻片，以蠟筆劃成3—4c㎡小格，如下圖

血清號 第1格 第2格 第3格 第4格

陽性血清對照 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

陰性血清對照 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

血清樣品1 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

血清樣品2 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

b試驗前，先將待檢血清、標準血清和抗原置於室温，使其達到20℃。

B將待檢血清、標準血清按上表中的量，垂直接觸玻片分別加到各方格內。

C搖勻抗原，每一血清格內分別垂直加入0.03ml抗原。

D自0.01ml血清格開始，用牙籤將抗原與血清完全混合，攤開直徑2CM左右，依次至0.02ml、0.04ml、0.08m血清格，一個血清樣使用一牙籤。

E輕輕搖動玻片後，室温靜置5—8min。春冬季節室温較低時，可置於30℃左右的温箱中。

F記錄結果

出現大凝集片或小粒狀物，液體完全透明，即100%凝集。

有明顯凝集片和粒，液體幾乎完全透明，即75%凝集。

有可見凝集片和顆粒，液體不甚透明，即50%凝集。

1.2.3 豬偽狂犬檢測方法：乳膠凝集試驗

操作步驟

取待檢樣品、陽性/陰性對照血清和稀釋液各一滴，分別置於玻片上，各加一滴乳膠抗原，用牙籤或火柴棍攪拌，並輕輕搖動1—2min後，於3—5min內觀察結果。

也可將血清作倍比連續稀釋，每個稀釋度加乳膠抗原進行定量分析。

C判定結果：

A所有對照成立，即陽性血清呈“ ”，陰性血清和稀釋液呈“—”，試驗方有效。樣品出現“++”以上者為陽性。

1.2.4 豬細小病毒檢測方法：乳膠凝集試驗。

2 調查內容

2.1 流行病學調查：通過查閲記錄，調查種源、胎次，發病的季節性。

2.2 飼養管理調查：主要包括飼料質量，營養成份，有無黴變；有無環境、機械等不良因素引起的，防疫、免疫、消毒是否落實到位。

2.3 臨牀病例剖解：包括對繁殖母豬的臨牀檢查及對發病母豬所產部分弱仔及新生病仔豬的病理剖檢觀察。

2.4 血清學檢測：對採得的212份血清樣品進行藍耳病抗體檢測和部分血清的偽狂犬、豬瘟、豬細小病毒檢測。

2 檢測結果及討論

3.1發生繁殖障礙的母豬有長白、約克及長白╳約克，發病母豬沒有明顯的品系差別；發病的胎次主要集中在第一胎，在第一胎過後，很多母豬不再表現明顯的繁殖障礙病(説明在第一胎過後產生了抗體對該病有一定的免疫保護力)；發病沒有季節性，一年四季均可發病；發病豬主要表現產死胎、木乃伊胎、弱仔和新生仔豬發病死亡。

3.2 豬場的飼料基本上都統一飼餵母豬專用料，不存在黴變和質量問題，也無環境或機械因素引起的流產和死胎。在採血檢查時除兩家豬場拿不出嚴格的免疫記錄檔案外，其他豬場都按免疫程序進行了免疫，並做到定期消毒。

3.3 剖檢弱仔和新生病仔豬，大體表現一致，體表貧血蒼白，皮下脂肪多黃染，腎呈土黃色，在表面有小出血點，有的淋巴結水腫出血呈大理石樣狀，心包積液，小葉性肺炎，肝褐黃色。

3.4 血清學檢測結果：

母豬繁殖障礙疾病血清學檢測統計表

豬場 藍耳病 偽狂犬 細小病毒 繁殖障

礙病史

樣品數 陽性數 陽性率 樣品數 陽性數 陽性率 樣品數 陽性數 陽性率

1場 35 10 28.6% 14 8 57.1% 14 6 42.9% 11頭流產、死胎、木乃伊胎

2場 32 7 21.9% 17 10 58.8% 17 8 47.1% 記載不詳

3場 14 5 35.7% 14 10 71.4% 14 9 64.3% 14頭流產、死胎、木乃伊

4場 20 14 70.0% 20 14 70.0% 20 16 80.0% 4頭髮流產

5場 26 13 50.0% 13 11 84.6% 13 9 69.2% 記載不詳

6場 13 2 15.4% 13 6 46.2% 13 7 53.8% 9頭流產、死胎、弱仔、木乃伊、

7場 9 1 11.1% 9 6 66.7% 9 5 55.6% 1配不上種、1頭產死胎、7頭流產、弱仔

8場 11 0 0.0% 11 8 72.7% 11 8 72.7% 11頭流產、死胎、木乃伊、弱仔

9場 12 7 58.3% 12 6 50.0% 12 7 58.3% 12頭流產、死胎、弱仔、木乃伊

10場 7 2 28.6% 7 6 85.7% 7 4 57.1% 7死胎、木乃伊

11場 7 3 42.9% 4 2 50.0% 4 3 75.0% 7頭髮生過流產、死胎、木乃伊

12場 24 16 66.7% 24 20 83.3% 24 17 70.8% 24頭髮生過流產、死胎、弱仔

13場 2 0 0.0% 2 2 100.0% 2 1 50.0% 2頭後備發病豬

合

計 212 80 37.7% 160 109 68.1% 160 100 62.5% 110頭繁

殖障礙

4 小結與分析

4.1 通過流行病學、飼料、飼養管理和對弱仔、新生病仔豬剖檢等各個方面的調查，排除了母豬繁殖障礙病因為品種、種源、飼料和飼養管理因素造成的可能。因為剖檢有一定的病理變化，説明是由病毒或病原微生物等致病因素引起。

4.2 本次監測採樣全由專業人員把關操作，藍耳病檢測採用美國進口ELISA試劑，微電腦數控機洗板，偽狂犬、細小病毒採用華中農業大學LAT試劑盒，其靈敏度高，監測結果可靠。

4.3 監測豬均未接種藍耳病疫苗免疫，經過豬偽狂犬、豬細小病毒疫苗免疫，被監測種豬羣體中有藍耳病陽性(+)，説明有感染豬或曾經感染過；偽狂犬、細小病毒的免疫合格率分別達到68.1%和72.5%説明了種豬的免疫效果較好。

4.4 本次監測的樣本較大，檢測結果具有代表性，監測結果，藍耳病樣品陽性37.7%(80/212)，其中1至5場樣品陽性率38.58%（49/127），豬場藍耳病樣品陽性率比較高；偽狂犬和細小病毒的免疫陽性率比較高，説明種豬在經過免疫或曾經感染後產生了對該病的較高抵抗力，免受強毒的攻擊。

4.5 在本次的調查中還發現，同一頭豬在藍耳病呈陰性（-），偽狂犬、細小病毒免疫抗體都達到免疫保護力的情況下，仍然存在繁殖障礙病，説明該豬場發生的繁殖病不僅由藍耳病、偽狂犬、細小病毒引起，還有其它繁殖障礙疾病參與。　

5 防制建議

繁殖障礙性疾病，特別是藍耳病，它是我縣的首次監測到的一個新病，它對養豬業的危害較重，一是引起嚴重的種豬繁殖障礙，導致其它疫病的免疫抑制，產生免疫失敗；二是隱性豬瘟很難控制和消除，是母豬繁殖障礙的潛在殺手；三是豬偽狂犬和豬細小病毒通過免疫後不能準確的判斷是否是決定性致病因素。面對當前繁殖障礙病，首先是加強藍耳病的免疫，控制毒力在羣內的進一步傳播；其次是進一步加強豬瘟、豬偽狂犬、豬細小病毒的免疫，使豬羣免疫合格率提高，降低因此三種病導致流產、死胎等的可能；第三是嚴把引種關，避免到藍耳病疫區調種豬，引種時必須經藍耳病檢測陰性（－）方能引進；第四是進一步對幾種繁殖病進行準確的監測診斷，並加大監測面，淘汰淨化陽性病豬，保持豬場乾淨。

參考文獻

1.《豬的重要傳染病防治研究新成果》；

2.《基礎獸醫學》；

3.《動物實驗室操作技術基礎知識》；