家兔角膜內皮細胞的表達研究碩士論文

所有動物的飼養及處死均按照nih的《實驗動物管理及使用指南》進行。

卡波姆(carbomer一940,美國古立德化學公司);質量分數0.15%地塞米松(江蘇連水製藥廠);sabc法免疫組織化學試劑盒、aqp一1多克隆抗體(武漢博士德公司);trizol一步法組織總rna提取試劑盒、一步法逆轉錄聚合酶鏈反應(one-stepreverse transcription polymerase chain -pc r)試劑盒(美國invitrogen公司)。

3o只家兔按完全隨機原則分為5組，分別為對照組，2、3、4、5周組，每組6只。家兔經25 g/l異戊巴比妥鈉60 mg/kg耳緣靜脈注射進行全身麻醉，質量分數0.4% 鹽酸奧布卡因滴眼液點眼2次進行表面麻醉，實驗組用1 ml消毒空針自家兔左眼角膜緣內1 mm刺入前房，抽出房水0.2 ml,注入0.2 ml複方卡波姆溶液(含質量分數0.3% 卡波姆和0.025%地塞米松)製作高眼壓模型。對照組左眼同法注入平衡鹽液0.2 ml.術畢，雙眼點用氯黴素滴眼液。造模後每日測量眼壓1次，裂隙燈下觀察眼結膜、角膜及虹膜等的反應。將h艮壓升高至>22 mmhg(1 mmhg=0.133 kpa)，並能持續1周以上者為高眼壓模型製作成功。建模後2周，處死對照組和2周組動物，3、4、5周時分別處死相應組動物，摘除左眼眼球。各組取3隻眼球儲存於一70℃ 冰箱中用於rt-pcr檢測;另外3隻眼用質量分數4% 多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，用於免疫組織化學檢測。